Икона происходит из часовни Покровского Зверина монастыря в Великом Новгороде.
Первые канонизированные Русской церковью князья Борис (? - 24 июля 1015) и Глеб (? - 5 сентября 1015) почитались как страстотерпцы, принявшие добровольно мученический венец. Согласно преданию, князья были убиты сводным братом Святополком, расчищавшим себе путь к власти. Культ этих святых начал складываться после их смерти в Вышгороде (под Киевом), где в Борисоглебском храме находились гробницы братьев, и очень скоро приобрел общерусское звучание. Борис и Глеб почитались прежде всего как покровители воинов и защитники земли русской.
В наиболее ранних иконах святые братья представлены в рост, строго фронтально, с традиционными атрибутами. Скорее всего, прототипом этих икон был древний образ, помещенный в храме-усыпальнице братьев (1072 г.?). Этому древнему варианту в целом принадлежит композиция иконы из Зверина монастыря. Новая черта, появившаяся в иконографии борисоглебских икон в XIII в., - отдельное, строго вертикальное положение меча, которое мы видим и здесь.
Особенности художественного языка произведения дают возможность датировать его 1440-ми гг.